分配層析法是根據(jù)一種或多種化合物，在兩種不相混合的溶劑間的分配來分離物質(zhì)的方法。相當(dāng)于一種連續(xù)液一液萃取法。在一定溫度下，物質(zhì)同時(shí)溶解于兩種相接觸的不相混合的溶劑中，其中一種溶劑吸收在支持物上，作為固定相，另一為流動(dòng)相，化合物在兩相中的濃度之比是一個(gè)常數(shù):分配系數(shù)。
 
一、分配層析法的原理： 

    分配柱層析所用儀器，操作過程都與一般吸附柱層析法相同，柱內(nèi)裝滿某種粉末狀物質(zhì)的載體，在載體的表面上保持一種液相，這種液相并不移行，故叫固定相，將混合物樣品溶液倒入柱內(nèi)后再用溶劑沖洗，此溶劑移行，故叫流動(dòng)相。沖洗時(shí)由于流動(dòng)相連續(xù)加入，混合物中各成分就一次又一次的在固定相和新的流動(dòng)相中按分配系數(shù)進(jìn)行多次分配。實(shí)質(zhì)上就是流動(dòng)相把各成分從固定相中連續(xù)提取出來，并向下移動(dòng)，結(jié)果分配系數(shù)大的成分移動(dòng)速度大，分配系數(shù)小的成分移動(dòng)速度小，因而彼此分離。 

    分配柱層析法使混合物*分離的基本條件是載體和混合物成分間根本沒有任何直接作用。特別是被分離的物質(zhì)在載體上的吸附作用是極小的。?有了這個(gè)條件，如果混合物各成分的分配系數(shù)之間又有一定的差別，沖洗層析柱時(shí)，就能形成純物質(zhì)的各個(gè)色層，分離即可*。此外，載體對(duì)所有的溶劑應(yīng)沒有親和力。 

二、分配層析法的操作步驟:

1、裝柱:分配柱層析的裝柱比吸附柱層析麻煩一些，但十分重要，直接影響分離效果。裝柱前，將固定相與載體混合，如果用硅膠、纖維素等載體時(shí)，可以直接稱出一定量固體，再加入一定比例的固定相液體，混勻后按吸附劑裝柱法裝入。裝柱也分干法和濕法兩種。應(yīng)注意的是：因?yàn)榉峙渲鶎游龇ㄊ褂脙煞N溶劑，所以事先必須先使這兩個(gè)相互相飽和，即將兩相溶劑放在一起振搖，待分層后再分別取出應(yīng)用。至少流動(dòng)相應(yīng)先用固定相飽和后再使用；否則，在以后洗脫時(shí)當(dāng)通過大量的流動(dòng)相時(shí)，就會(huì)把載體中的固定相逐漸溶掉．后只剩下載體，就不成為分配色譜了。  
  用硅藻土為載體，加固定相直接混合的辦法不容易得到均勻的混合物。為此先把硅藻土放在大量流動(dòng)相液體中，在不斷攪拌下，逐漸加入固定相，加時(shí)不宜太快，加完后繼續(xù)攪拌片刻。有時(shí)因局部吸著水分（固定相）過多，硅藻土?xí)鄢纱髩K，可用玻璃棒把它打散．使硅藻土顆粒均勻，然后填充柱管，分批小量地倒入柱中，用一端是平盤的棒把硅藻土壓緊壓平，隨時(shí)把過多的溶劑放出。待全部裝完后，應(yīng)得到一個(gè)均勻填好的層析柱。流動(dòng)相通過時(shí)的流速與硅藻土所含的水分和固定相有關(guān)，水分太多時(shí)流動(dòng)困難。一般每克硅藻土多可以吸著2-3ml水溶液，再多時(shí)流動(dòng)相就不容易通過。  
  
    反相分配柱層析中多用纖維素粉末為支持劑，與固定相混合方法按一般操作。通常是將選好的固定相溶劑與載體拌勻，在布氏漏斗上抽濾除去多余的固定相后，倒入事先選定的流動(dòng)相溶劑中，劇烈攪拌使兩相互相飽和平衡，然后在層析管中加入已用固定相飽和的流動(dòng)相，按一般濕法裝柱。 

2、加樣

①如樣品能溶于流動(dòng)相，可用少量流動(dòng)相溶解，用吸管輕輕沿管壁加于含固定相載體的上端，然后加流動(dòng)相洗脫；  
②如樣品難溶于流動(dòng)相，易溶于固定相，則可用少量固定相溶解，加少量載體拌勻吸著后裝于柱管頂端載體的上端，然后加流動(dòng)相洗脫； 
③如樣品在兩相中都不易溶解，則可用其他揮發(fā)性溶劑溶解后，拌入干燥的載體，待溶劑揮發(fā)除盡后，加適量(樣品量的50%-100%)的固定相拌勻，加入柱頂。樣品量與載體重量之比為1∶100—1∶1000。

3、洗脫

   用流動(dòng)相洗脫的方法與吸附層析法相同。但有一點(diǎn)須注意，流動(dòng)相溶劑在使用前也應(yīng)以固定相液予以飽和，否則層析過程中固定相的體積會(huì)發(fā)生變化，平衡條件就被破壞，影響分離效果。

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